大鼠ELISA檢測試劑盒固體樣本處理原則操作流程

發布時間：2018-06-25 點擊次數：2747次

　　大鼠ELISA檢測試劑盒固體樣本處理原則：稱取1g的固體樣本，用9g的緩沖液溶解，蛋白可以直接離心取上清檢測，細胞內的蛋白，要先收集細胞，再用破碎，離心取上清。

　　1、組織標本：切割標本后，稱取1g組織，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分），仔細收集上清。分裝一份待檢測，其余冷凍備用，保存中如有沉淀形成，應再次離心。對于植物組織，不好勻漿的話，就在液氮中充分研磨；

　　2、大鼠ELISA檢測試劑盒細胞內蛋白樣本

　　許多待測蛋白不是蛋白，而是存在于細胞內的蛋白，這個時候，要先收集細胞，洗滌干凈，再破碎細胞，離心取上清。

　　大鼠ELISA檢測試劑盒操作流程如下：

　　（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設3個平行孔；設兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。

　　（2）酶標板置4℃，包被過夜。

　　（3）洗板：吸干孔內反應液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。

　　（4）陰性對照孔每孔加入PBS50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。

　　（5）酶標板置37℃培養箱的濕盒內，孵育60min。

　　（6）洗板，同（4）。

　　（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液100μl。

　　（8）酶標板置37℃培養箱的濕盒內，孵育60min。

　　（9）洗板，同（4）。

　　（10）每孔加TMB顯色液100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應15-20min。

　　（11）每孔加100μl2mol/LH2SO4終止反應。

　　（12）分別測450nm吸光值W1和630nm吸光值W2，zui終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

　　（13）數據處理：在得出標本（S）和陰性對照（N）的OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。

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